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1.實驗目的
嘗試用化學試劑檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質。
2.原理
生物組織中有些有機化合物能與某些化學試劑產生特定的顏色反應。
(1)糖類:
①還原糖+斐林試劑50~65℃水浴加熱約2 min→磚紅色沉澱。
②澱粉+碘液→藍色。
(2)脂肪+蘇丹 III 染液→橘黃色;脂肪+蘇丹 IV 染液→紅色。
(3)蛋白質+雙縮脲試劑→紫色。
3.材料用具
(1)實驗材料的選擇:
①還原糖的鑑定實驗中,最理想的實驗材料是還原糖含
量較高的生物組織(或器官),而且組織(或器官)的顏色要較淺或近於白色。可選用蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿蔔等;不能選用甜菜、甘蔗,因為它們所含的大部分糖類為蔗糖,蔗糖屬於非還原糖;馬鈴薯因澱粉含量較多,也不能作實驗材料;不能選西瓜或含還原糖的綠色葉片等作實驗材料,以避免顏色的干擾。
②脂肪的鑑定實驗中,實驗材料最好選用富含脂肪的種子。
③蛋白質的鑑定實驗中,最好選用富含蛋白質的生物組織,植物材料常用的是大豆,動物材料常用的是雞蛋的蛋清。
(2)試劑的使用:
斐林試劑極不穩定,需要現配現用,並且需要水浴加熱;
雙縮脲試劑使用時應先加 A 液搖勻後,再加 B 液。
還原糖含量較高、白色或近於白色的植物組織
選材
(制勻漿→一層紗布過濾→取樣液)
製備組織樣液
剛配製的
斐林試劑
1 mL
組織樣液
2mL
生成磚紅
色沉澱
顯色反應
呈現藍色
50~65℃
水浴加熱2 min
結論組織樣液中含有還原糖
(2)澱粉的檢測和觀察:
取材馬鈴薯勻漿
檢測向組織樣液中滴加2滴碘液,搖勻後變成藍色
結論馬鈴薯勻漿樣液中含有澱粉
(3)脂肪的檢測和觀察:
方法一:
取材花生種子(浸泡)去掉種皮
XS
切片將子葉切成薄片
①取最理想的薄片,放在載玻片中央
②染色:在薄片上滴2~3滴蘇丹 II 染液,染色3 min (如果用蘇丹 IV 染液,染色1min)
③去浮色:用體積分數為50%的酒精溶液洗去浮色
④製成臨時裝片:滴一滴蒸餾水,蓋上蓋玻片
觀察先在低倍顯微鏡下找到已著色的圓形小顆粒,然後
製片
換高倍顯微鏡觀察
結論花生種子中含有脂肪
方法二、組織標衝
十蘇丹川
檢測向組織樣液中滴加2滴碘液,搖勻後變成藍色
結論馬鈴薯勻漿樣液中含有澱粉
(3)脂肪的檢測和觀察:
方法一:
取材花生種子(浸泡)去掉種皮
SX
物必修|
切片將子葉切成薄片
①取最理想的薄片,放在載玻片中央
②染色:在薄片上滴2~3滴蘇丹 II 染液,染色3 min (如果用蘇丹 IV 染液,染色1 min )
③去浮色:用體積分數為50%的酒精溶液洗去浮色
④製成臨時裝片:滴一滴蒸餾水,蓋上蓋玻片
觀察先在低倍顯微鏡下找到已著色的圓形小顆粒,然後
製片
換高倍顯微鏡觀察
結論花生種子中含有脂肪
方法二:組織樣液
(4)蛋白質的檢測和觀察:
選材與製備大豆組織研磨液
十蘇丹染色,橘黃色
雙縮脲試
劑 A 液1mL
振盪搖勻
﹣無色
雙縮脲試劑
B 液4滴
組織樣液
2mL
顯色反應
搖勻,後變
成紫色
結論大豆組織樣液中含有蛋白質
5.實驗分析
(1)檢測前留出部分樣液的原因:
雖然還原糖與蛋白質的檢測實驗是驗證性實驗,但也要注意對照。在檢測前留出一部分樣液,是為了與檢測後樣液的顏色變化作對照,以增強實驗的可信度。
(2)各反應出現的顏色變化及原因:
①用斐林試劑檢測還原糖的實驗:
組織樣液剛加入斐林試劑時,呈現 Cu ( OH )2溶液的顏色,即淺藍色;加熱後,部分 Cu ( OH ),被還原成磚紅色的Cu2O沉澱,兩者混合,溶液呈現棕色;隨著反應的繼續進行, Cu ( OH ),全部被還原成Cu2O,溶液轉變為磚紅色。顏色變化為:淺藍色→棕色→磚紅色。
②用雙縮脲試劑檢測蛋白質的實驗:
加入雙縮脲試劑 A 液,溶液為無色;再加入雙縮脲試劑 B 液,因有 Cu ( OH ),生成,故呈現淺藍色;振盪均勻後,由於反應的進行,出現紫色的絡合物。顏色變化為:無色一淺藍色→紫色。
(3)斐林試劑使用的注意事項:
因為斐林試劑很不穩定,容易生成淺藍色的 Cu ( OH ),沉澱,所以應將甲液與乙液分別配製儲存,且現配現用。使用時,只有先將其配製成 Cu ( OH ),溶液,才能與還原糖反應產生磚紅色的沉澱。若先加入 NaOH 溶液,還原糖中的還原性半縮醛羥基就會被氧化而失去還原性,再加入 CuSO 溶液後不能產生磚紅色的Cu2O沉澱。
(4)雙縮脲試劑的使用:
先加入雙縮脲試劑 A 液,形成鹼性環境,因為只有在鹼性環境中,蛋白質才容易與 Cu 發生顏色反應。若加入過量的雙縮脲試劑 B 液, CuSO 在鹼性溶液中將生成大量的藍色 Cu ( OH ),沉澱,會遮蓋實驗中產生的紫色,影響觀察結果。
生成磚紅
色沉澱
藍色
染色
先去
,然後
/歸納拓展/
斐林試劑與雙縮脲試劑的比較
雙縮脲試劑
斐林試劑
專案
A 液
B 液
甲液
乙液
g \/ mL g \/ mL NaOH 溶液 CuSO 溶液
還原糖
甲、乙兩液等量混勻後
立即使用
50~65℃水浴加熱
組織樣液中出現磚紅色沉澱
g \/ mL g \/ mL NaOH 溶液
CuSO 溶液
成分
鑑定物質
蛋白質
先加入 A 液1 mL ,搖勻,
再加入 B 液4滴,搖勻
不需加熱,搖勻即可
新增順序
反應條件
反應現象
組織樣液變為紫色