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1．實驗目的
嘗試用化學試劑檢測生物組織中的糖類、脂肪和蛋白質。
2．原理
生物組織中有些有機化合物能與某些化學試劑產生特定的顏色反應。
(1）糖類：
①還原糖＋斐林試劑50~65℃水浴加熱約2 min→磚紅色沉澱。
②澱粉＋碘液→藍色。
(2）脂肪＋蘇丹 III 染液→橘黃色；脂肪＋蘇丹 IV 染液→紅色。
(3）蛋白質＋雙縮脲試劑→紫色。
3．材料用具
(1）實驗材料的選擇：
①還原糖的鑑定實驗中，最理想的實驗材料是還原糖含
量較高的生物組織（或器官），而且組織（或器官）的顏色要較淺或近於白色。可選用蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿蔔等；不能選用甜菜、甘蔗，因為它們所含的大部分糖類為蔗糖，蔗糖屬於非還原糖；馬鈴薯因澱粉含量較多，也不能作實驗材料；不能選西瓜或含還原糖的綠色葉片等作實驗材料，以避免顏色的干擾。
②脂肪的鑑定實驗中，實驗材料最好選用富含脂肪的種子。
③蛋白質的鑑定實驗中，最好選用富含蛋白質的生物組織，植物材料常用的是大豆，動物材料常用的是雞蛋的蛋清。
(2）試劑的使用：
斐林試劑極不穩定，需要現配現用，並且需要水浴加熱；
雙縮脲試劑使用時應先加 A 液搖勻後，再加 B 液。
還原糖含量較高、白色或近於白色的植物組織
選材
（制勻漿→一層紗布過濾→取樣液）
製備組織樣液
剛配製的
斐林試劑
1 mL
組織樣液
2mL
生成磚紅
色沉澱
顯色反應
呈現藍色
50~65℃
水浴加熱2 min
結論組織樣液中含有還原糖
(2）澱粉的檢測和觀察：
取材馬鈴薯勻漿
檢測向組織樣液中滴加2滴碘液，搖勻後變成藍色
結論馬鈴薯勻漿樣液中含有澱粉
(3）脂肪的檢測和觀察：
方法一：
取材花生種子（浸泡）去掉種皮
XS
切片將子葉切成薄片
①取最理想的薄片，放在載玻片中央
②染色：在薄片上滴2~3滴蘇丹 II 染液，染色3 min （如果用蘇丹 IV 染液，染色1min)
③去浮色：用體積分數為50％的酒精溶液洗去浮色
④製成臨時裝片：滴一滴蒸餾水，蓋上蓋玻片
觀察先在低倍顯微鏡下找到已著色的圓形小顆粒，然後
製片
換高倍顯微鏡觀察
結論花生種子中含有脂肪
方法二、組織標衝
十蘇丹川
檢測向組織樣液中滴加2滴碘液，搖勻後變成藍色
結論馬鈴薯勻漿樣液中含有澱粉
(3）脂肪的檢測和觀察：
方法一：
取材花生種子（浸泡）去掉種皮
SX
物必修|
切片將子葉切成薄片
①取最理想的薄片，放在載玻片中央
②染色：在薄片上滴2~3滴蘇丹 II 染液，染色3 min （如果用蘇丹 IV 染液，染色1 min )
③去浮色：用體積分數為50％的酒精溶液洗去浮色
④製成臨時裝片：滴一滴蒸餾水，蓋上蓋玻片
觀察先在低倍顯微鏡下找到已著色的圓形小顆粒，然後
製片
換高倍顯微鏡觀察
結論花生種子中含有脂肪
方法二：組織樣液
(4）蛋白質的檢測和觀察：
選材與製備大豆組織研磨液
十蘇丹染色，橘黃色
雙縮脲試
劑 A 液1mL
振盪搖勻
﹣無色
雙縮脲試劑
B 液4滴
組織樣液
2mL
顯色反應
搖勻，後變
成紫色
結論大豆組織樣液中含有蛋白質
5．實驗分析
(1）檢測前留出部分樣液的原因：
雖然還原糖與蛋白質的檢測實驗是驗證性實驗，但也要注意對照。在檢測前留出一部分樣液，是為了與檢測後樣液的顏色變化作對照，以增強實驗的可信度。
(2）各反應出現的顏色變化及原因：
①用斐林試劑檢測還原糖的實驗：
組織樣液剛加入斐林試劑時，呈現 Cu ( OH )2溶液的顏色，即淺藍色；加熱後，部分 Cu ( OH )，被還原成磚紅色的Cu2O沉澱，兩者混合，溶液呈現棕色；隨著反應的繼續進行， Cu ( OH )，全部被還原成Cu2O，溶液轉變為磚紅色。顏色變化為：淺藍色→棕色→磚紅色。
②用雙縮脲試劑檢測蛋白質的實驗：
加入雙縮脲試劑 A 液，溶液為無色；再加入雙縮脲試劑 B 液，因有 Cu ( OH )，生成，故呈現淺藍色；振盪均勻後，由於反應的進行，出現紫色的絡合物。顏色變化為：無色一淺藍色→紫色。
(3）斐林試劑使用的注意事項：
因為斐林試劑很不穩定，容易生成淺藍色的 Cu ( OH )，沉澱，所以應將甲液與乙液分別配製儲存，且現配現用。使用時，只有先將其配製成 Cu ( OH )，溶液，才能與還原糖反應產生磚紅色的沉澱。若先加入 NaOH 溶液，還原糖中的還原性半縮醛羥基就會被氧化而失去還原性，再加入 CuSO 溶液後不能產生磚紅色的Cu2O沉澱。
(4）雙縮脲試劑的使用：
先加入雙縮脲試劑 A 液，形成鹼性環境，因為只有在鹼性環境中，蛋白質才容易與 Cu 發生顏色反應。若加入過量的雙縮脲試劑 B 液， CuSO 在鹼性溶液中將生成大量的藍色 Cu ( OH )，沉澱，會遮蓋實驗中產生的紫色，影響觀察結果。
生成磚紅
色沉澱
藍色
染色
先去
，然後
／歸納拓展／
斐林試劑與雙縮脲試劑的比較
雙縮脲試劑
斐林試劑
專案
A 液
B 液
甲液
乙液
g \/ mL g \/ mL NaOH 溶液 CuSO 溶液
還原糖
甲、乙兩液等量混勻後
立即使用
50~65℃水浴加熱
組織樣液中出現磚紅色沉澱
g \/ mL g \/ mL NaOH 溶液
CuSO 溶液
成分
鑑定物質
蛋白質
先加入 A 液1 mL ，搖勻，
再加入 B 液4滴，搖勻
不需加熱，搖勻即可
新增順序
反應條件
反應現象
組織樣液變為紫色